通蔚生物教您如何選擇合適的二抗
如何選擇二抗？通常情況下，某一特定的實(shí)驗(yàn)中可能同時(shí)有幾種二抗可供選擇，如何能選擇到適合該實(shí)驗(yàn)的二抗，需要綜合以下幾個(gè)方面進(jìn)行考慮：
1.一抗的物種來(lái)源
根據(jù)一抗的物種來(lái)源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗。
2.一抗的亞型
一般來(lái)說(shuō)多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。而單克隆抗體則相對(duì)復(fù)雜些，具有多種亞型，二抗除了要與一抗的種屬來(lái)源相一致，還需與一抗的亞型相匹配。
3.二抗的種屬來(lái)源
一般來(lái)說(shuō)，不同的種屬來(lái)源的二抗在實(shí)驗(yàn)里沒(méi)有太多的差別。特殊的實(shí)驗(yàn)里類似雙標(biāo)的免疫實(shí)驗(yàn)更合適。
4.選擇哪種形式的二抗，是整個(gè)IgG分子，F(xiàn)ab片段，還是F(ab')2片段？
整個(gè)IgG分子：此種抗體適用于多數(shù)情況。
Fab片段：它們只有一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，一般用來(lái)封閉內(nèi)源性免疫球蛋白。
F(ab')2片段：該種抗體是由兩個(gè)靠二硫鍵連接的用于結(jié)合抗原的Fab片段組成，這些抗體用在特定的情況中，如需要避免抗體與具有Fc受體的細(xì)胞結(jié)合的情況。
5.二抗的偶聯(lián)標(biāo)記
一般來(lái)講，偶聯(lián)到二抗上的探針主要有酶（辣根過(guò)氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP等），熒光基團(tuán)（FITC, TR, PE）和生物素。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗(yàn)。