elisa試劑盒包含了抗原、抗體、活性介質和酶等組分，當抗原抗體相互結合時，就會形成抗原抗體復合物。當復合物中含有活性介質時，它可以使一種特定的酶有活性，這種酶可以將抗原和抗體中的某一物質催化變成另一物質，產生具有一定的吸光度的產物，這就是elisa 試劑盒的基本原理。
由于elisa 試劑盒的容易操作、易于反應性能進行管理和檢測，以及檢測準確、結果可靠等優點，它成為目前應用為廣泛的免疫學技術之一，是診斷和檢測抗原抗體的有力工具。
試劑的準備
按elisa試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑。LIS中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應為新鮮的和高質量的。自配的緩沖液應用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。
加樣
在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結合物，加底物。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產生氣泡。
加標本一般用微量加樣器，按規定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴，以免發生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清，可在試管中按規定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。
保溫
在ELISA中通常有兩次抗原抗體反應，即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當。