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ELISA試劑盒的關鍵步驟-清洗

日期:2025-06-15 23:52
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摘要:洗滌參數: 一些參數會影響洗滌步驟的效果。個主要的參數是洗滌里。自動洗板機會分配洗滌液。如果你之前速遇過高背景,那么不要猶豫,將洗滌里調為高,是比包被體積更高。太少的洗滌液會讓一部分分析表面洗滌不到,從而明顯增加背景。所有反應孔的洗滌里必須相同。ELIS板的制造商通常會在試劑盒的使用手冊中列出包被里。行業中通常使用的包被里是2001。如果你的試劑盒也是這樣,那么制造商可能會建議使用300u1洗滌液進行洗滌,以便清潔整個反應孔的壁。一般來說,洗滌里越高,則孵育步驟殘留的抗體或抗原里就越少。
ELISA試劑盒實驗一般包含兩個或以上的孵育步驟,中間以洗滌隔開。ELISA通常在96孔板中開展,其上包被了結合抗原或抗體。在封閉步驟后,包被后的平板首先與一抗或抗原孵育。隨后通過一些洗滌步驟去除未結合(低親和力)的抗原-抗體復合物。接著,平板與二抗孵育。這種帶有酶的抗體與高親和力的抗原-抗體復合物結合。之后,又是一輪洗滌。是添加底物并檢測信號。下面就讓上海通蔚生物為您講解關于洗滌的具體操作。
洗滌參數:
一些參數會影響洗滌步驟的效果。個主要的參數是洗滌里。自動洗板機會分配洗滌液。如果你之前速遇過高背景,那么不要猶豫,將洗滌里調為高,是比包被體積更高。太少的洗滌液會讓一部分分析表面洗滌不到,從而明顯增加背景。所有反應孔的洗滌里必須相同。ELIS板的制造商通常會在試劑盒的使用手冊中列出包被里。行業中通常使用的包被里是2001。如果你的試劑盒也是這樣,那么制造商可能會建議使用300u1洗滌液進行洗滌,以便清潔整個反應孔的壁。一般來說,洗滌里越高,則孵育步驟殘留的抗體或抗原里就越少。
洗滌次數:

影響洗滌效果的主要參數是洗滌循環的里。當然,洗滌次數越多,背景越低。然而,太多次的洗滌會降低信號強度,使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復洗滌三次。不過,ELISA板的制造商會對洗滌次數提出建議。一般而言,制造商包被平板需要的洗滌次數比用戶包被的平板要少。對于用戶包被的ELISA板,必須優化洗滌次數。

ELISA試劑盒

ELISA實驗雖然看起來有點簡單,但是這并不能成為我們掉以輕心的借口,實驗過程中應該仔細檢查洗滌步驟,保證實驗的結果。
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