通蔚生物NAD蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測試盒微量法測定意義

測定意義:
MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,線粒體中 MDH 是 TCA 循環的關鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中 MDH 催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH 在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天-冬氨-酸穿梭系統、活性氧代謝和抗病性等。根據不同的輔酶特異性,MDH 分為 NAD-依賴的 MDH 和 NADP-依賴的MDH,中通常只含有 NAD-MDH,在真核細胞中,NAD-MDH 分布于細胞質和線粒體中。
測定原理:
NAD-MDH 催化 NADH 還原草酰乙酸生成蘋果酸,導致 340nm 處光吸收下降。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標-儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。
樣本測定的準備:
1、細胞或組織樣品的制備:
培養細胞:先收集或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照或細胞數量(104 個):試劑一體積(mL)為 1000~2000:1 的比例(建議 2000 萬或細胞加入 1mL 試劑一),超聲波破碎或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
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