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產品名稱： Pfu DNA Polymerase(含預混Mg2+的10×Pfu Buffer)
產品型號： 500 U, 2.5 U/ul
產品廠商：通蔚生物
產品價格：322
產品庫存：117
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簡單介紹：

Pfu DNA Polymerase(含預混Mg2+的10×Pfu Buffer)該酶無 5’→3’核酸外切酶活性，PCR 反應中的延伸速度一般為0.5-1kb/min，比 Taq DNA Ploymerase 要低。該酶熱穩定性更好，95℃1 小時仍保持90%以上的活性，對于 GC 含量很高的模板，變性溫度可以提高到98℃而不影響其活性。使用該酶進行 PCR 擴增得到的產物為平末端，不能直接用 TA 載體克隆。

詳情介紹：

Pfu DNA Polymerase(含預混Mg2+的10×Pfu Buffer）

產品特點

Pfu DNA Ploymerase 是從克隆有 Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase 基因的大腸桿菌中表達并經過柱純化分離出來的重組蛋白，其分子量為 90kD。該酶具有3’→5’核酸外切酶活性，能糾正 DNA 擴增過程中產生的錯配，是目前已發現的所有耐熱DNAPolymerase中出錯率低的。

該酶無 5’→3’核酸外切酶活性，PCR 反應中的延伸速度一般為0.5-1kb/min，比 Taq DNA Ploymerase 要低。該酶熱穩定性更好，95℃1 小時仍保持90%以上的活性，對于 GC 含量很高的模板，變性溫度可以提高到98℃而不影響其活性。使用該酶進行 PCR 擴增得到的產物為平末端，不能直接用 TA 載體克隆。

成分規格

產品組成	規格
Pfu DNA Polymerase	250Ｕ/ 2.5U/μl
10 × Taq Plus Buffer（含 Mg2+）	1m / 2*1 ml
-20℃，有效期 1 年
本產品僅供科研使用　，不得用于其它用途

使用方法

（注意：以下舉例為常規PCR反應體系和反應條件，實際操作中應根據模板、引物結構和目的片段大小不同進行相應的調整和優化）

1. PCR 體系：

推薦體系（50μl）

產品組成	規格
Pfu DNA Polymerase	250Ｕ/ 2.5U/μl
10 × Taq Plus Buffer（含 Mg2+）	1m / 2*1 ml
-20℃，有效期 1 年
本產品僅供科研使用　，不得用于其它用途

注意：

A 引物濃度請以終濃度 0.1-1.0μM 作為設定范圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發生非特異性反應時，可降低引物濃度，由此優化反應體系。

B 鎂離子濃度請以終濃度 1.5-3mM 作為設定范圍的參考。可根據不同的引物對和模板來調節鎂離子濃度，由此優化反應體系）

2. PCR 程序

過程		溫度	時間
預變性		94℃	5min
25－35cycles	變性	94℃	30sec
	退火	55－65℃	30sec
	延伸	72℃	1kb/60sec
	終延伸	72℃	5min

注意：

Ａ一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度 Tm 低 5℃，無法得到理想的擴增效率時，適當降低退火溫度；發生非特異性反應時，提高退火溫度，由此優化反應條件。

b 延伸時間應根據所擴增片段大小設定，Taq DNA Polymerase的擴增效率為 1 kb/60 sec。

C 可根據擴增產物的下游應用設定循環數。如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，錯配機率會增加，非特異性背景嚴重。所以，在保證產物得率的前提下，應盡量減少循環次數）

3. 結果檢測：

反應結束后取 5 μl 反應產物，加入適量上樣緩沖液后進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。

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產品名稱： Pfu DNA Polymerase(含預混Mg2+的10×Pfu Buffer)